Rapidez y seguridad para la detección de patógenos en alimentos y agua

Promega Biotech Ibérica SL, filial de la norteamericana Promega con sede en Madrid, y Microbial SL, con sede en Gerona, han presentado una solución completa para la extracción, cuantificación y detección de patógenos –microorganismos que pueden causar enfermedades- con el fin de proteger la seguridad y calidad de los alimentos y del agua,  así como para evitar el fraude alimentario.

 


  • Este sistema detecta Salmonella y Listeria en tan solo 24 horas; y Legionella, en 5 horas.
  • Mediante la automatización, y con un protocolo estandarizado, se optimiza el número de muestras procesadas y se elimina el error humano.
  • La misma tecnología que Promega facilita a los Cuerpos de Seguridad del Estado para sus investigaciones forenses, se adapta ahora a la seguridad alimentaria, lo que se conoce como Food Forensics.

 

Se trata de técnicas basadas en el ADN que permiten analizar alimentos, incluso después de ser sometidos a temperaturas críticas. Además, la rapidez en el análisis, fundamental en productos perecederos, hace que este nuevo sistema de RT-PCR -modernas metodologías de análisis genético- supere a los métodos microbiológicos convencionales.

 

Gijs Jochems, director general de Promega Biotech Ibérica SL -izquierda-, y Jesús García-Gil, director general de Microbial SL -derecha-

 

Esta solución incluye la instrumentación y los kits necesarios para realizar la extracción automatizada de múltiples muestras a la vez. Contiene asimismo protocolos específicos para distintos tipos de muestras y matrices alimentarias: detección de patógenos en alimentos y agua, identificación y detección por RT-PCR de especies animales (equina, porcina, ovina, bovina, caprina, pollo y pavo) y detección de alérgenos (almendra, avellana, cacachuete, sésamo, apio, pescado, gluten, mostaza, marisco, girasol y soja; y  puede aplicarse también para la detección y control de GMOs (organismos modificados genéticamente).

 

La solución presentada combina la extracción con la detección, porque nuestras soluciones se adaptan a las necesidades de cualquier empresa o laboratorio. Soluciones diferentes, con protocolos específicos, para análisis diferentes

 

La extracción automática del ADN se realiza mediante el sistema de extracción Maxwell RSC, diseñado por Promega, capaz de procesar 16 muestras simultaneamente.

 

 

 

NGS, selección del tamaño adecuado de fragmentos

Una de las partes críticas en un workflow NGS  es la preparación de la biblioteca, que en casi todos los casos implica algún tipo de purificación selectiva de tamaño para eliminar los fragmentos no deseados que interferirán con los pasos de preparación, secuenciación y análisis de la biblioteca posterior.

Existen distintos procedimientos para eliminar  enzimas y tampones  no deseados,  o  nucleótidos y adaptadores empleados para preparar la biblioteca. En los métodos de selección de tamaño dual, los fragmentos de ADN más grandes y más pequeños se eliminan para garantizar el tamaño óptimo de la biblioteca antes de la secuencia final.

En todos los casos, la precisa selección de tamaño es clave para garantizar los resultados de la secuenciación  NGS.

Los métodos y químicas actuales implican purificaciones seriadas que causan pérdidas del 20-30% de ADN en cada paso de purificación. En principio, solo sería necesario un mayor material de partida -en ocasiones limitado-  o más ciclos de PCR que pueden causar sesgos en la secuenciación.

 

Son tres los factores principales responsables de la falta de reproducibilidad  de los métodos de selección por tamaño actuales:

  • Alta viscosidad. La química empleada se adhiere a las puntas causando errores de pipeteo y falta de reproducibilidad que se solventan con programaciones muy ajustadas de protocolos automatizados.
  • Velocidad de la respuesta magnética. La resina química presenta una respuesta lenta al imán que requiere aumentar los tiempos de incubación para permitir una captura completa de ADN. En los métodos de selección de tamaño dual pueden generarse cortes de tamaño incorrectos y fragmentos más grandes de los deseados.
  • Especificidad  de tamaño. Las químicas actuales dificultan la eliminación total de los fragmentos grandes que pueden interferir con el clustering.

 

Emplea el nuevo sistema ProNex® y selecciona los fragmentos de 100 pb a 750 pb  de dsDNA.

El sistema de purificación selectiva de tamaño ProNex®, basado en resina magnética,  presenta  menor viscosidad, y un tiempo de respuesta de imán aproximadamente cinco veces mayor que las perlas AMPure® XP, lo que permite una selección de tamaño más precisa y con mejores rendimientos


Viscosidad

 


Capacidad magnética

 

 


Ensayo RealTime-Glo™ Annexin V para Apoptosis y Necrosis

 

RealTime-Glo™ Annexin V Apoptosis and Necrosis Assay mide en tiempo real la exposición de Fosfatidilserina (PS) en la superficie de las membranas celulares durante el proceso apoptótico, permitiendo discriminar las células en sus diferentes estadíos.


Célula sana                                              Apoptosis temprana                             Necrosis secundaria

La tecnología NanoBiT emplea 2 proteinas de fusión a Anexina que al aproximarse constituyen una luciferasa funcional

 

Monitorización continua

Ensayo no lítico que monitorizsa en tiempo real la unión de Anexina V y el estado apoptótico

Ensayos en placa y escalables

No necesita paso intermedio de lavado y es escalable en formato high-throughput

Facilidad

Añade un único rectivo y realiza distintas medidas en el lector de placas

 


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